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2001年，该实验室取得了全面发展。在科研方面，承担的"973"项目、自然基金重大项目、国际合作项目等都取得了较好的进展。在国内率先完成了蓝耳病病毒基因组全序列测定，获得了全长基因组CDNA克隆，构建了蓝耳病病毒M基因和GP5基因的稳定表达细胞系，构建了蓝耳病病毒全长基因组分子克隆。完成了山东分离株(SD株)、大庆分离株(DQ-3)结构基因ORF2-7以及密山分离株(MS-1)ORF7基因的克隆及序列分析。获得了能稳定分泌抗蓝耳病病毒抗体的骨髓瘤细胞株4株。此外证实了蓝耳病病毒ORF5诱导的细胞凋亡。采用分段克隆测序的方法，克隆了新城疫病毒F48E9株病毒全基因组，并完成全部序列的测定。将克隆到的新城疫病毒 F48E9株的P和NP基因分别亚克隆到不同载体中，构建了转移载体质粒，并经筛选获得了各自的重组病毒。采用新城疫病毒F基因具有代表意义的主要功能区核苷酸序列(1-374)，绘制中国新城疫病毒流行毒株的系统发育进化树(包括国外的代表毒38株)。筛选出基因VII型特异性以及V4和La Sota疫苗株具有明显差异的抗原决定簇，为病毒的功能研究奠定了重要基础。利用反向基因操作技术，构建了 H5N1 PR8病毒8个基因组片段的负链RNA转录载体，以及 PB2、PB1、PA和NP的4个蛋白表达载体。对所有基因进行了全序列分析确证。利用上述12个质粒共同转染293T细胞，成功救获了PR8病毒。救获病毒具有原病毒高度鸡胚适应生物学特性，但在MDCK细胞上只有胰酶存在的情况下才能形成蚀斑，不致SPF鸡死亡，显示了低致病力禽流感病毒特性，为快速构建针对流行毒株抗原性的疫苗株提供了重要手段。对禽流感H5、H7、 H9亚型标准毒株病毒的HA、 NA、M 3个主要基因进行了RT-PCR扩增，并克隆到T载体上进行测序。制备用于杂交的探针，构建探针库，将经过杂交试验验证过的探针固定到一个载体上，利用反向杂交原理，最终建立可用于高通量检测的基因芯片诊断方法。从国内分离到50株禽流感病毒，对于3株进行了毒力相关基因Ha基因及Ns基因的测序分析，其中15株为全序列测定。建立了33株禽流感病毒血凝素基因、非结构蛋白基因的系统发育树，并分析了当前中国的禽流感流行趋势。
在兽医生物技术应用方面，构建了禽流感HA-NA双基因重组禽痘病毒转移载体，并筛选了重组病毒，证实重组病毒对 SPF鸡的免疫效力，已通过了基因工程产品的安全评估；完成了新城疫病毒血凝素--神经氨酸酶基因的禽痘病毒载体构建；以酵母表达系统对鸡传染性法氏囊病毒保护性基因进行了高效表达，并证明了其免疫效果；鸡传染性喉气管炎——鸡痘活载体二价基因工程疫苗已经进行了区域实验和部分中试，取得了较好的实验结果，显示了基因工程疫苗的良好前景。这些都为重要禽病新型疫苗的研制应用奠定了基础。2001年，该室以较好的成绩通过了国家第三次评估。
2001年，承担国家重点基础研究发展规划"973"项目、"863"项目、国家自然科学基金重大项目、国家自然科学基金项目和社会公益研究专项资金项目等课题18项。共发表文章86篇。申报专利一项--马传染性贫血病毒弱毒疫苗株的感染性分子克隆；鸡痘和传染性喉气管炎二价基因工程疫苗通过了国家基因工程产品安全评估。
在学术交流方面，该室有18人次参加了国内外学术会议，交流论文48篇。有9名国内外知名学者应邀来访，国际粮农组织兽医处的Mark Rweyemamu博士介绍了跨国界动物疫病防治特点。日本东京大学免疫教研室的小野寺节教授就当前热点Pront和疯牛病作了广泛交流。澳大利亚昆士兰医学研究所的郑远志博士报告了应用随机突变技术对人 HPRT酶基因的结构与功能分析。英特威(intervet)兽医生物制品公司的薛文志、张树成博士就疯牛病的最新进展、伴侣动物传染病及疫苗、美国及欧洲兽医疫苗的开发、规程申请等专题分别作了报告。美国加州AVE- Blotch公司的安锦华博士就多糖的应用、产品的研发及知识产权的保护作了专题报告。
(谢红海) |
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